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2023-02-071880 次浏览
细胞复苏

实验材料:

基础培养基                          

血清(常规为FBS/NBS

电动移液枪 

移液管[NEST]

无冰冰盒[NEST]

T25培养瓶[NEST]

自动旋盖机[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]

100mm细胞培养皿[NEST]

15mL50mL无菌离心管[NEST]

 

不能忘记的准备:

1.记得一定要预定干冰!!!不然你细胞取出来可没地方待了,要是液氮罐距离实验室远点,你的细胞可能就没了。

2.用来转移细胞的无冰冰盒一定要灭菌!!!当然,如果条件刻苦点的泡沫盒,也不要偷懒,无论什么装载容器,都要提前灭菌,可以有效规避污染风险。

3.水浴锅提前预热至37℃。

4.培养基预热至37℃。

 

要开始了!(敲黑板):

1.在生物样本库中搜寻到目标细胞,在液氮罐找到对应的细胞,放入预先准备好的无冰冰盒(容器)内。冰盒内装有碎干冰,冰芯的铝合金外壳协同高导热的合金模块,确保样品能快速冷却,孔之间的温度差异小于0.1℃,能很好的维持样品间的温度一致性。

2.在细胞进入水浴锅解冻前,务必将冻存管竖直立在桌面上10~20s,这样之后,可能排空存在在冻存管盖缝隙内的液氮。尤其是外旋盖的冻存管,特别要注意!不然在水浴解冻的时候有概率会砰的一声爆发出来!极为危险。

3.将冻存管在37℃水浴锅内水浴解冻,因为DMSO在常温情况下对细胞有毒副作用,若解冻时间过长,会导致细胞损伤并影响其存活率,所以一定要快,解冻过程在1~2min内完成。

4.解冻完成后,在生物安全柜内,用自动旋盖机打开冻存管,之后在移液枪将冻存管内细胞复悬,然后将细胞悬液转移至含有5~10ml培养基的离心管中,1000rmp离心5min(根据各自细胞的特新调整离心力和离心时间)。如果没有培养基稀释,在离心过程中较高浓度的DMSO会对细胞损伤,影响活存活率!

5.丢弃上清,里面还有DMSO和死去细胞的裂解产物,这不是我们所需要的。将剩余的细胞用培养基稀释复悬,稀释比例为1:10~1:15,再按照大家各自实验需求,分装到100mm培养皿或者T25瓶中,显微镜观察细胞状态,然后转移至细胞培养箱中培养。

 

复苏后的注意点:

复苏后记得每天都要观察细胞状态,及时更换培养基,确保细胞所需营养的充足和生长环境的清洁。

 

使用到的NEST产品:

移液管[NEST]

无冰冰盒[NEST]

T25培养瓶[NEST]

自动旋盖机[NEST]

盒装无菌吸头[NEST]

100mm细胞培养皿[NEST]

15mL50mL无菌离心管[NEST]

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